Alat Rapid Antigen: Conhecimento básico da detecção de ácido nucleico - Parte 2

Antígeno de Alat Rapid.: Conheça a detecção de ácido nucleico

PCR quantitativo de fluorescência em tempo real

Tecnologia de PCR quantitativa de fluorescência em tempo real refere-se ao método de adicionar grupos fluorescentes ao sistema de reação de PCR, utilizando sinais fluorescentes para monitorar todo o processo de PCR em tempo real e, finalmente, analisando quantitativamente o modelo desconhecido através da curva padrão.

O princípio desta tecnologia é marcar a sonda com grupo fluorescente, marcar o grupo fluorescente R no final de 5 'e marcar o grupo de luxo Q no final de 3 '. Quando não há amplificação de PCR, o grupo fluorescente é extinto e não emite a fluorescência devido à estreita distância espacial entre o grupo fluorescente e o grupo de apinhamento; quando a PCR é amplificada, o primer e a sonda específica marcada fluorescente são combinadas no modelo ao mesmo tempo. A posição de ligação entre a sonda marcada fluorescente e o modelo está localizado entre os primers a montante e a jusante. A sonda fluorescente é hidrolisada usando a atividade de exonuclease 5 '3' da enzima TAQ, e o grupo fluorescente é liberado. Por ser separado do grupo de extinção no espaço, emite fluorescência. A fluorescência emitida pode ser detectada pela sonda de fluorescência, amplificada e detectada ao mesmo tempo, de modo a realizar a detecção \"em tempo real \". Passa apenas o salto de PCR de semi quantitativo para quantitativo, mas também tem características de forte especificidade, alto grau de automação e resolvendo efetivamente o problema da poluição do PCR em comparação com a PCR convencional.

Detecção de DNA de cadeia ramificada - BDNA

BDNA é um método para detecção quantitativa de RNA do tipo 1 HIV em plasma.bdna refere-se a um fragmento de DNA sintético com cadeias laterais. Cada cadeia lateral pode ser rotulada com um marcador animado. O RNA do HIV é liberado das partículas de vírus por centrifugação, e depois capturado nas microporais com sonda de captura

Especificamente liga-se a outra parte do RNA viral e também se liga à sonda pré-amplificada. O último é então hibridizado com a sonda de amplificação, a sonda BDNA. Os dois conjuntos de sondas alvo se ligam especificamente a diferentes regiões do gene POL de complexos de RNA.Hivrna são formados em microporos.O sinal de quimioiluminescência pode ser amplificado após a incubação com um substrato de quimioluminescência.it é quantificado por intensidade luminosa, que é proporcional ao conteúdo da HIVRNA na amostra.bdNA não tem contaminação cruzada de amplicons, que é um grande progresso Comparado com PCR.BDNA tem dezenas de sondas cobrindo todo o genoma, o que pode facilmente detectar algumas variantes de HIV, mas a sensibilidade não é tão sensível quanto PCR. Melhorar a sensibilidade do BDNA é uma dificuldade importante.

Etapas de detecção

O processo de detecção da tecnologia de detecção qualitativa de ácido nucleico do HIV é dividido em extração de ácido nucleico, síntese de transcrição reversa de cDNA, reação de amplificação de PCR, análise qualitativa de produtos de amplificação, julgamento de resultados e relatório de conclusão.