Alat Rapid Antigen: Conhecimento básico da detecção de ácido nucleico - Parte 1

Antígeno de Alat Rapid.: conhecimento básico da detecção de ácido nucleico

1. Qual é a detecção de ácido nucleico?

Definição de ácido nucleico: o ácido nucleico é um tipo de macromoléculas biológicas ligadas por nucleotídeos ou desoxinucleótidos através de 3 ', 5' - fibras de fosfato.

O ácido nucleico tem funções biológicas muito importantes, principalmente armazenamento e transmissão de informações genéticas.

2. Classificação de ácidos nucleicos

Macromoléculas de ácido nucleico podem ser divididas em duas categorias: ácido desoxirribonucleico (DNA) e ácido ribonucleico (RNA).

3. Composição do ácido nucleico

O DNA e o RNA são formados conectando a cabeça e a cauda de um nucleotídeo, que é composto de cinco elementos: C, H, O, N e P.DNA é o material genético da maioria dos organismos. O RNA é um material genético de alguns vírus livres de DNA, como HIV, influenza, vírus SARS, etc.A duração média do RNA é de cerca de 2000 nucleótidos, enquanto o DNA humano é muito longo, cerca de 3x10 ^ 9 nucleótidos.

4. Função do ácido nucleico

Ele desempenha um papel na armazenagem e transmissão de informações genéticas em replicação de proteínas e síntese. O ácido hucleico não é apenas o material genético básico, mas também desempenha um papel importante na biossíntese de proteínas. Portanto, desempenha um papel decisivo em uma série de fenômenos de vida importantes, como crescimento, hereditariedade e variação.

O DNA e o RNA são ácidos nucleicos. Quais são as diferenças em sua composição química da seguinte forma:

5. Método de teste

O método de detecção de ácido nucleico detecta principalmente o ácido nucleico alvo na amostra, ampliando simultaneamente o ácido nucleico alvo e gerando o sinal detectável. Pode ser aplicado à detecção de ácido nucleico em microbiologia clínica, triagem de sangue, diagnóstico e prevenção da doença genética, medicina forense e outros campos.

Actualmente, os principais métodos utilizados são os seguintes:

uma. A amplificação dependente da sequência do ácido nucleico

A NASBA é uma nova técnica para a amplificação isotérmica do RNA mediada por um par de primers, que é a sequência nucleotídica contínua e uniforme e específica in vitro. A reação foi realizada a 42 ℃, e o modelo de RNA poderia ser amplificado cerca de 109 vezes em 2 O princípio da NASBA é extrair RNA viral, adicionar transcriptase reversa de AMV, RNase H, T7RNA polimerase e primers para amplificação. A reação inteira é dividida em fase não cíclica e fase cíclica: na fase não cíclica, primer I e modelo O RNA é recozido para sintetizar o ADNc sob a ação da transcriptase reversa da AMV para formar o RNA: DNA híbrido, então o RNaseh degrada RNA, o Primer II e o ADNc são recozidos para sintetizar a segunda vertente complementar do ADN sob a ação de transcriptase reversa. A polimerase, DNA encalhada dupla pode ser iniciada pela sua sequência de promotor para transcrever RNA. O RNA pode ser reverso transcrito no DNA sob a ação da transcriptase reversa, insira a fase de circulação e amplie um grande número de modelos.

b. Amplificação mediada por transcrição

O princípio técnico da TMA é basicamente o mesmo que o da NASBA. A pequena diferença é que TMA usa transcriptase reversa MMLV e T7RNA polimerase. A transcriptase reversa do MMLV possui atividade de transcriptase reversa e atividade de RNase H.A reação foi realizada a 41,5 ℃, e o modelo de RNA poderia ser amplificado cerca de 109 vezes em 1 hora.

c. Reação em cadeia catalisada LIGASE (LCR)

A LCR é uma tecnologia de amplificação de sonda com base na interconexão das sondas de oligonucleótidos dependentes da molécula alvo. É uma promissora da tecnologia de amplificação in vitro desenvolvida após o princípio PCR.its é hibridizar a sonda de DNA de encalhada única de oligonucleótido de dois segmentos com a sequência alvo. Quando a sonda de DNA de dois segmentos se desvanece com o modelo sem mutação, se as duas sondas são adjacentes e não há intervalo de nucleotídeo no meio, eles podem ser conectados sob a ação da ligase, e a nova cadeia após a conexão pode ser usada como Modelo para orientar a conexão no próximo ciclo para produzir novas sub cadeias. Se ocorrer a mutação básica do nucleotídeo na seção de conexão, a reação de conexão não pode ocorrer e a reação de amplificação é rescindida.

d. Ensaio de reação em cadeia de polimerase (PCR)

O princípio básico da tecnologia de PCR é semelhante ao processo de replicação natural do DNA, e sua especificidade depende de iniciadores de oligonucleótidos complementares às duas extremidades da seqüência alvo.PCR consiste em três etapas básicas de reação: extensão de recozimento de desnaturação.

① Desnaturação do DNA do Modelo: Após o DNA do Modelo é aquecido a cerca de 93 ℃ por um determinado momento, a década dupla do DNA de modelo ou o DNA de dupla fita formada pela amplificação de PCR é dissociada para formar uma única vertente, para que possa ser combinada com primers para se preparar para a próxima rodada de reação.

② Recozimento (Reenvolvimento) de DNA de Modelo e Primer: Após o DNA de modelo é aquecido e desnaturado em uma única vertente, a temperatura cai para cerca de 55 ℃, e o primer é emparelhado com a sequência complementar da cadeia única do DNA de modelo único.

③ Primer Extension: Sob a ação da polimerase Taqdna, o conjugado de primer de DNA usa DNTP como matéria-prima reação e sequência alvo como modelo para sintetizar uma nova cadeia de replicação semi-semi-retida à cadeia de DNA de modelo de acordo com o princípio do emparelhamento de base e de semi-retidos. replicação. Repita os três processos da extensão de recozimento de desnaturação cíclica para obter mais \"cadeias de replicação de semi-retidas \", e esta nova cadeia pode se tornar o modelo para o próximo ciclo.it demora 2-4 minutos e 2-3 horas para amplificar o gene alvo Para serem expandidos milhões de vezes. Para detectar o RNA do HIV, precisamos transcrever RNA em ADNc por reação de transcrição reversa e, em seguida, amplificação de PCR com cDNA como modelo. Esta reação é chamada de RT-PCR.